RIASSUNTO E SPIEGAZIONE DEL TEST
La malaria è una malattia febbrile, emolitica e trasmessa dalle zanzare che infetta oltre 200 milioni di persone e uccide più di 1 milione di persone all'anno.È causata da quattro specie di Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.Tutti questi plasmodi infettano e distruggono gli eritrociti umani, producendo brividi, febbre, anemia e splenomegalia.P. falciparum causa malattie più gravi rispetto alle altre specie plasmodiali e rappresenta la maggior parte dei decessi per malaria.P. falciparum e P. vivax sono i patogeni più comuni, tuttavia esiste una notevole variazione geografica nella distribuzione delle specie.
Tradizionalmente, la malaria viene diagnosticata mediante la dimostrazione dei microrganismi su spessi strisci di sangue periferico colorati con Giemsa e le diverse specie di plasmodio si distinguono per la loro comparsa negli eritrociti infetti1.La tecnica è in grado di fornire diagnosi accurate e affidabili, ma solo se eseguita da esperti microscopisti utilizzando protocolli definiti2, il che presenta grossi ostacoli per le aree remote e povere del mondo.
Il kit di test rapido Malaria Pf / Pan Antigen è stato sviluppato per risolvere questi ostacoli.Il test utilizza una coppia di anticorpi monoclonali e policlonali contro la proteina specifica di P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II) e una coppia di anticorpi monoclonali contro il plasmodio lattato deidrogenasi (pLDH), una proteina prodotta dalle quattro specie del plasmodio, consentendo così il rilevamento e la differenziazione simultanei dell'infezione da P. falciparum e/o uno qualsiasi degli altri tre plasmodi.Può essere eseguito da personale non addestrato o minimamente qualificato, senza attrezzature di laboratorio.
PRINCIPIO
Il kit Pf/Pan Malaria Rapid Test è un immunodosaggio cromatografico a flusso laterale.I componenti della striscia reattiva sono costituiti da: 1) un tampone coniugato di colore bordeaux contenente anticorpo murino anti-PHRP-II coniugato con oro colloidale (pHRP II-coniugato oro) e anticorpo murino anti-pLDH coniugato con oro colloidale (coniugato pLDH-oro),
2) una striscia di membrana di nitrocellulosa contenente due bande test (bande Pan e Pv) e una banda di controllo (banda C).La banda Pan è pre-rivestita con anticorpo monoclonale anti-pLDH mediante il quale è possibile rilevare l'infezione con una qualsiasi delle quattro specie di plasmodi, la banda Pf è pre-rivestita con anticorpi policlonali anti-pHRP-II per il rilevamento dell'infezione da Pf e la banda C è rivestita con IgG anti-topo di capra.
Durante l'analisi, un volume adeguato del campione di sangue viene dispensato nel pozzetto del campione (S) della cassetta del test, un tampone di lisi viene aggiunto al pozzetto del tampone (B).Il tampone contiene un detergente che lisa i globuli rossi e rilascia vari antigeni del plasmodio, che migrano per azione capillare attraverso la striscia contenuta nella cassetta.Il pHRP-II, se presente nel campione, si legherà ai coniugati pHRP-II-oro.L'immunocomplesso viene quindi catturato sulla membrana dagli anticorpi anti-pHRPII pre-rivestiti, formando una banda Pf di colore bordeaux, che indica un risultato positivo del test Pf.pLDH, se presente nel campione, si legherà ai coniugati oro pLDH.L'immunocomplesso viene quindi catturato sulla membrana dall'anticorpo anti pLDH pre-rivestito, formando una banda Pan di colore bordeaux, che indica un risultato del test positivo per il plasmodio.In assenza della banda di Pan, si può raccomandare un risultato positivo del test per uno qualsiasi degli altri tre plasmodi.
L'assenza di bande di test (Pan e Pf) suggerisce un risultato negativo.Il test contiene un controllo interno (banda C) che dovrebbe presentare una banda di colore bordeaux dell'immunocomplesso di IgG anti-topo di capra / IgG di topo (coniugati pHRP-II e pLDH-oro) indipendentemente dallo sviluppo del colore su una qualsiasi delle bande del test.In caso contrario, il risultato del test non è valido e il campione deve essere testato nuovamente con un altro dispositivo.
